El Mycobacterium avium
subesp. paratuberculosis disminuye la regulación
de la expresión del ARNm
de la ferroportina 1 en los macrófagos
inducidos con hierro
Bertha Landeros Sánchez*1
José A. Gutiérrez Pabello2
Gerardo E. Medina Basulto3
Tomás B. Rentería Evangelista4
Efrén Díaz Aparicio5
Sawako Oshima3
1 Laboratorio de Biología Molecular
Facultad de Ciencias Químicas e Ingeniería
Universidad Autónoma de Baja California
Calzada Universidad 14418, Parque Industrial Internacional Tijuana
22390, Tijuana, Baja California, México
2 Departamento de Inmunología y Microbiología
Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia
Universidad Nacional Autónoma de México
Av. Universidad 3000, 04510
Ciudad de México, México
3 Laboratorio de Biología Molecular
4 Laboratorio de Brucelosis y Tuberculosis
Instituto de Investigaciones en Ciencias Veterinarias
Universidad Autónoma de Baja California
km. 3.5 Carretera San Felipe
Fraccionamiento Campestre
Mexicali, Baja California, 21386, México
5 Centro Nacional de Investigación
Disciplinaria en Microbiología
Instituto Nacional de Investigaciones
Forestales, Agrícolas y Pecuarias
Carretera Federal Cuernavaca-Cuautla No. 8534
Col. Progreso, 62550, Jiutepec, Morelos, México
*Autor para correspondencia:
Tel: +52 664-265-4845
Correo electrónico: bertha.landeros@uabc.edu.mx
Recibido: 2015-07-16
Aceptado: 2016-03-16
Publicado: 2016-03-31
DOI: http://dx.doi.org/10.21753/vmoa.3.1.361
Información y declaraciones adicionales aquí
Derechos de autor: Bertha Landeros Sánchez et al. 2016
open access
Distribuido bajo una Licencia Creative Commons Atribución 4.0 Internacional (CC-BY 4.0)
Resumen
El Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (map) es el agente causal de la enfermedad de Johne. Los mecanismos por los cuales map es capaz de adaptarse a la respuesta natural del huésped aún no están claros. A través de la pcr en tiempo real, se examinaron los niveles de expresión del arn de la ferroportina 1 (fpn1) en células de macrófagos de ratón J774 infectados con Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis o con el extracto crudo de proteína (ecp) de map. La multiplicidad de infección (moi) con map dependió de la disminución de los niveles del arnm de la fpn1. Los macrófagos infectados con las moi de 20:1 y 15:1 no mostraron cambio alguno en la expresión del gen fpn1, mientras que en las moi de 10:1 y 5:1, disminuyó en un 50% y 80%, respectivamente. En los macrófagos tratados con 50, 100, 150 y 200 μg/mL de ECP de map (ATCC19698), la expresión del arnm de fpn1 disminuyó 25%. La sobreexpresión del arnm de fpn1 en macrófagos J774 tratados con una sobrecarga de hierro de 400 μM de nitrilotriacetato férrico (fenta) se suprimió cerca de un 70% por la infección con map viva (moi 20:1). Estos datos revelaron que map inhibe la expresión del arnm de fpn1, lo que sugiere que existe un mecanismo bacteriano que participa en la regulación del hierro del huésped.
Palabras clave: Expresión génica; Enfermedad de Johne; Ferroportina 1; Hierro; Macrófagos.
Introducción
La paratuberculosis (ptb) es una enfermedad infecciosa caracterizada por causar diarrea y enterocolitis granulomatosa en rumiantes domésticos y silvestres. El Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP) es el agente etiológico; este patógeno es capaz de infectar a los macrófagos entéricos y vivir de forma intracelular. Para multiplicarse dentro de las células del huésped, las bacterias requieren satisfacer sus demandas metabólicas específicas, entre ellas, de hierro —elemento clave que funciona como cofactor de muchas proteínas celulares que participan en el transporte de electrones, la desintoxicación de especies reductoras de oxígeno (ros) y la síntesis de adn (Eckelt et al., 2014, 2015).
El hierro no está disponible libremente, por lo tanto, las bacterias utilizan diferentes mecanismos de absorción para adquirirlo. Para ello, las bacterias producen sideróforos, hemóforos y receptores de superficie celular que capturan hemoproteínas (Krewulak y Vogel, 2008). En las micobacterias, la micobactina es una pseudobactina responsable de la unión y el transporte del hierro en las células. La micobactina es codificada por un grupo de genes denominados mbta-j que inician su síntesis; en map el gen mbta es más corto y codifica una versión incompleta de esta proteína. El truncamiento del gen mbta puede explicar por qué map no es capaz de producir micobactina, por lo que es necesario agregarlo al medio de cultivo en el laboratorio (Li et al., 2005).
A pesar de que in vitro se requiere micobactina, map sobreexpresa los genes implicados en la síntesis de micobactina en macrófagos bovinos (Zhu et al., 2008). En presencia de hierro, el regulador transcripcional de map, el gen ldeR, reconoce secuencias consenso en regiones llamadas “cajas de hierro”, localizadas en las regiones del promotor de genes encargadas de regular la expresión de genes implicados en la adquisición (mbt) y almacenamiento (bfra) de hierro (Janagama et al., 2009, 2010). Recientemente se caracterizó el interactoma de otro mecanismo de adquisición de hierro en map que depende del óxido nítrico (Lamont et al., 2013).
La regulación de la homeostasis del hierro en los macrófagos involucra varias proteínas (Weiss, 2009). Los macrófagos pueden adquirir el hierro por medio del receptor de transferrina 1 (tfr1) y su captura está mediada por la transferrina. El hierro molecular puede obtenerse a través del transportador 1 (dmt1) o por fagocitosis de los eritrocitos viejos. El hierro entonces se transporta, reutiliza y almacena en los macrófagos gracias a la interacción de elementos reguladores de hierro (ires) con proteínas reguladoras del hierro (irps). La ferroportina 1 (fpn1) es una proteína de exportación de hierro que está presente en la superficie de los macrófagos, hepatocitos, enterocitos y eritrocitos y transporta la forma ferrosa del hierro (Fe2 +) (Abboud et al., 2000; Donovan et al., 2000; McKie et al., 2000). La salida de hierro de los macrófagos está controlada por la hepcidina, que interactúa con la fpn1. Esta interacción resulta en la internalización y degradación de la fpn1 a través de los proteosomas, lo que bloquea el flujo de salida de hierro de los macrófagos (Nemeth et al., 2004). La acumulación de hierro dentro del macrófago promueve el desarrollo de patógenos intracelulares y disminuye la secreción de il-6 (Ganz, 2009). La expresión del arnm de fpn1 en los macrófagos aumenta con la infección de Mycobacterium tuberculosis (mtb) y Mycobacterium avium (ma). Sin embargo, se obtuvo un incremento mayor en la expresión del arnm del gen fpn1 en mtb y de macrófagos infectados por ma cuando, de forma clásica, los macrófagos se activaron con interferón gamma (ifnγ) (Van Zandt et al., 2008), aunque el efecto de map en la expresión del arnm de fpn1 aún no se comprende.
Tomando en cuenta las funciones y la importancia de la fpn1 y del hierro durante la infección de map en los macrófagos, se hipotetizó que se necesita una alta concentración de hierro para la sobrevivencia de las micobacterias en los macrófagos durante el proceso de infección; por lo tanto, la expresión del arnm de fpn1 debería estar disminuida para facilitar el establecimiento de la infección.
En este estudio, se examinaron los niveles de expresión del arnm de fpn1 mediante la reacción en cadena de la polimerasa (pcr) en tiempo real en la línea celular de macrófagos de ratón J774. Para ello, se infectaron los macrófagos con map vivo, con o sin hierro y con el extracto de proteína cruda de map, lo que permitió identificar la inhibición de la expresión del arnm de fpn1 como efecto directo de map en macrófagos tratados con hierro.
Materiales y métodos
Cultivos bacterianos y extracto de proteína cruda
El map (atcc 19698) se cultivó en medio Middlebrook 7H 9 suplementado con ácido oleico, albúmina, catalasa (oadc) (Difco, Detroit, MI, USA), dextrosa y micobactina (Allied Monitor Inc., USA) (4 mg/L) durante cuatro semanas. Las bacterias se almacenaron a -70°C en alícuotas de 1 mL con 4 x 108 unidades formadoras de colonias (ufc)/mL en medio rpmi 1640 (Difco, Detroit, MI, USA), con l-glutamina, aminoácidos, piruvato de sodio y bicarbonato de sodio (rpmi completo [crpmi]), con glicerol al 10%. La dilución y plateo de bacterias en medio Middlebrook 7H 11 con agar, suplementado con oadc y micobactina, confirmó el número de bacterias. Se prepararon extractos de proteína cruda de map a partir de un cultivo de 50 mL de un mes de crecimiento. La suspensión bacteriana se centrifugó por 20 min a 3,000 X g, las bacterias se lavaron con pbs 1X y se resuspendieron en crpmi. La suspensión se mezcló con sílice en una proporción de 1 g/mL durante 5 min y se centrifugó 20 min a 3,000 X g para eliminar restos celulares; el sobrenadante se filtró a través de una membrana de 0.22 μm. Se aplicó el método de Bradford para determinar la concentración de proteínas de map del extracto filtrado. Las alícuotas del extracto de proteínas crudas se mantuvieron a -70°C hasta que se les utilizó.
Cultivo celular de macrófagos de ratón J774
La línea celular de los macrófagos de ratón J774 se propagó en crpmi enriquecido con 5% de suero fetal bovino inactivado con calor, sin antibióticos. Los cultivos se mantuvieron a 37°C con 5% de co2. Los macrófagos se diluyeron con azul tripano y se cuantificaron mediante el uso de una cámara de Neubauer. Se sembraron 1 x 106 células por pocillo en cada placa de seis pozos. Los macrófagos se cultivaron a 37°C con 5% de co2 durante cuatro horas para permitir la adherencia a la superficie. Las células no adherentes se retiraron lavando con crpmi suplementado con 5% de suero fetal bovino. Los macrófagos adherentes se utilizaron para los experimentos posteriores.
Tratamiento de macrófagos con map vivo y con extracto de proteína cruda
Para identificar el efecto en la expresión del arnm de fpn1 del tratamiento del extracto de proteína cruda de map y map vivo, se pusieron a cultivar las placas con monocapas de 1 x 106 macrófagos infectados con MAP vivo o tratados con el extracto de proteína cruda de MAP. Para la infección, se utilizaron cuatro diferentes multiplicidades de infección (mois 5:1, 10:1, 15:1 y 20:1); después las placas se centrifugaron a 200 X g durante 10 min y se incubaron a 37°C durante seis horas. Para el tratamiento con proteína, los pocillos se incubaron con 50, 100, 150 o 200 μg/mL de proteína cruda de map durante 6 horas. Al finalizar el tiempo de incubación, se eliminó el medio de cultivo de todos los tratamientos; las células se lavaron una vez con pbs 1X, y se les extrajo el arn total. El resultado de la expresión de fpn1 en los macrófagos fue el promedio de tres experimentos independientes, cada uno con tres repeticiones.
Tratamiento de macrófagos con ácido nitrilotriacetato férrico (fenta)
Con el fin de identificar el efecto del tratamiento con hierro en la expresión del gen fpn1 en los macrófagos, éstos se incubaron con diferentes concentraciones de ácido nitrilotriacético férrico (fenta), un donador de hierro a la transferrina. Los macrófagos J774 de ratón (1 x 106 células) se indujeron con 100, 200 y 400 μm fenta por 6, 9 o 12 horas en medio crpmi suplementado con 5% de suero bovino fetal.
Para determinar el efecto de map en la infección de macrófagos con una sobrecarga de hierro, los macrófagos se infectaron con una moi 20:1 o se les cultivó con 200 μg/mL del extracto de proteína cruda de map y 400 μM de fenta (fenta- map).
En todos los tratamientos, el medio se eliminó cuando finalizó la incubación, las células se lavaron una vez con pbs y el arn total fue extraído y almacenado a -70°C. Los resultados de la expresión del gen fpn1 de los macrófagos son el promedio de tres experimentos independientes, cada uno con tres repeticiones.
Extracción del arn total
El arn total de los macrófagos se aisló con el kit RNeasy (Qiagen, Hilden, Alemania), siguiendo las recomendaciones e instrucciones del fabricante. Todas las muestras se trataron con adnasa (adnasa libre de arnasa) y se purificaron usando el kit RNeasy MinElutetm Clean (Qiagen, Hilden, Alemania), siguiendo las instrucciones del fabricante. La integridad del arn se evaluó por electroforesis en gel de agarosa al 1%, y se cuantificó midiendo la relación de la densidad óptica de 260/280 nm mediante el NanoDrop (Thermo Fisher Scientific Inc.)
Síntesis de adn complementario (adnc)
El adnc se sintetizó de cuatro unidades (4 U) de enzima transcriptasa reversa Omniscript1 (Qiagen, Hilden, Alemania), siguiendo las instrucciones del fabricante. La enzima reaccionó en un volumen final de 20 μL, que contenía un buffer de transcriptasa reversa (1 X), dntp, (0.5 mM cada uno), primers oligo-dT (1 μM), arn total (1 μg) y agua libre de nucleasas. La mezcla se incubó durante 60 min a 37°C y la enzima se inactivó a 95°C durante 5 min. El volumen final se ajustó a 400 μL con agua libre de nucleasas y se almacenó a -80°C hasta su uso.
pcr en tiempo real
Los oligonucleótidos específicos para amplificar el gen fpn1 de ratón fueron: (sentido 5’ GCGTCATTGCTGCTAGAATCG 3’, antisentido 5’ CATGGAGTTCTGCACACCGTT 3’) y como gen de control interno se usó el gen de gapdh (sentido 5’ ACGGCACAGTCAAGGCAGAGAA 3’, antisentido 5’ TCTCGCTCCTGGAAGATGGTGA 3’). Estos oligonucleótidos se diseñaron utilizando el software Primer Express 2.0. La pcr en tiempo real se realizó en el termo-analizador génico LightCycler 480 II (Roche, Suiza) y se utilizó el reactivo LightCycler® 480 DNA SYBR Green I Master (Roche, Indianapolis, IN, EE.UU.). Las reacciones de amplificación se llevaron a cabo a un volumen final de 20 µL, que contenía 10 µL del reactivo tampón 2X SYBR Green I master, los cebadores (S y A, 0.1 µL de cada uno), 5 µL de adnc diluido y 4.8 µL de agua libre de nucleasas.
Todas las reacciones se colocaron en placas de 96 pocillos ópticos, que primero se incubaron a 95ºC durante 10 min seguido de 45 ciclos a 95ºC durante 10 s, a 60ºC durante 15 s y a 72ºC durante 15 s. Los valores de la fluorescencia se colectaron en cada ciclo. Al final de los 45 ciclos, se corrió una extensión final de 5 min a 72ºC.
Se analizó la curva de fusión de cada mensajero para demostrar la especificidad y la eficiencia de la amplificación por la pcr se determinó mediante diluciones seriadas de muestras de adnc. Se corrió un testigo negativo sin adnc (cst, Control Sin Templado) en cada placa para evaluar la especificidad global; cada muestra se corrió por triplicado. Se determinó el umbral del ciclo (Ct, por sus siglas en inglés) para cada muestra a través de la fase de crecimiento exponencial y la señal de referencia de fluorescencia con respecto al número de ciclos. La muestra se consideró positiva si la fluorescencia superaba el umbral. Las curvas de fusión se transformaron a las primeras derivadas negativas de las curvas de fusión. En el análisis de las curvas de fusión, los primeros picos derivados negativos, característicos de la temperatura de fusión del producto de la pcr, identificaron los productos específicos de la pcr. Las reacciones de amplificación también se comprobaron de manera rutinaria para detectar la presencia de productos no específicos mediante electroforesis en gel de agarosa. Los valores del umbral del ciclo de la muestra se utilizaron para calcular las unidades de expresión relativa (uer) por el método comparativo 2 -ΔΔCt (Qiagen. Integrative solutions solutions – real-time PCR applications, 2006). Los resultados se obtuvieron de tres experimentos independientes con tres repeticiones cada uno.
Análisis estadístico
Los resultados se analizaron por análisis de varianza de una vía seguido por la prueba de Dunnett, usando el programa GraphPad Prism 6.0.7 (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, USA). La significancia estadística se estableció a P ≤ 0.05.
Resultados
La infección con MAP de los macrófagos de ratón indujo una expresión diferencial del arnm de la fpn1, que dependió de la multiplicidad de infección
La infección con map vivo disminuyó los niveles del arnm de la fpn1 de manera dependiente de las MOIs utilizadas en este estudio. En comparación con el grupo testigo, los macrófagos infectados con MOIs de 20:1 y 15:1 no mostraron un cambio significativo en la expresión del gen fpn1, mientras que las MOIs de 10:1 y 5:1 indujeron una disminución de 50% y 80%, respectivamente (P ≤ 0.05, figura 1).
Figura 1. La infección con MAP inhibió la expresión del gen fpn1 en los macrófagos. Los macrófagos de ratón J774 se infectaron con MAP a diferentes multiplicidades de infección (MOI) durante 6 horas. Se extrajo el ARN total y la expresión del gen fpn1 se midió por PCR en tiempo real. Los resultados se normalizaron con el gen gadph y se expresaron en unidades de expresión relativa (UER). Los resultados son la media ± la desviación estándar de tres experimentos independientes con tres repeticiones cada uno. Significancia estadística, P ≤ 0.05.
La estimulación con diferentes concentraciones de extracto de proteína cruda de map disminuyó la expresión del arnm de la fpn1 en macrófagos de ratón
Se analizó el efecto del extracto de la proteína cruda de map en la expresión del arnm de la fpn1 de macrófagos de ratón J774. En este estudio, se decidió utilizar un rango de concentración de proteína que abarcara los límites de la variación experimental reportada en otras investigaciones (Ciaramella et al., 2004; López et al., 2003, 2015; Sanchez et al., 2008). En los macrófagos tratados con 50, 100, 150 y 200 μg/mL de extracto crudo de proteína, la expresión del arnm de la fpn1 disminuyó 25% (P ≤ 0.05, figura 2).
Figura 2. El tratamiento de los macrófagos con el extracto de la proteína cruda de MAP inhibió ligeramente la expresión del gen fpn1. Los macrófagos de ratón J774 se incubaron con diferentes concentraciones de extracto de la proteína cruda de MAP durante 6 horas. Se extrajo el ARN total y la expresión del gen fpn1 se midió por PCR en tiempo real. Los resultados se normalizaron con el gen gadph y se expresaron en unidades de expresión relativa (UER). Los resultados son la media ± la desviación estándar de tres experimentos independientes con tres repeticiones cada uno. Significancia estadística, P ≤ 0.05.
El tratamiento con diferentes concentraciones de fenta indujo la expresión del arnm de la fpn1 en macrófagos de ratón
La expresión del arnm de la fpn1 se indujo con una sobrecarga de hierro en macrófagos de ratón J774 en presencia de 100, 200 y 400 μM de fenta a las 6, 9 y 12 horas. Los macrófagos tratados con fenta mostraron un aumento en la expresión del gen fpn1 en todos los tiempos estudiados (P ≤ 0.05, figura 3), que dependió de la concentración de FeNTA. Sin embargo, el tratamiento con 400 μM durante 6 horas indujo el mayor incremento (10 veces más). Por lo tanto, estas condiciones se utilizaron en experimentos posteriores.
Figura 3. El tratamiento de los macrófagos con FeNTA aumentó la expresión del gen fpn1 de una manera dependiente de la dosis. Los macrófagos de ratón J774 se incubaron con diferentes concentraciones de FeNTA durante 6, 9 y 12 horas. Se extrajo el ARN total y la expresión del gen fpn1 se midió por PCR en tiempo real. Los resultados se normalizaron con el gen gadph y se expresaron en unidades de expresión relativa (UER). Los resultados son la media ± la desviación estándar de tres experimentos independientes con tres repeticiones cada uno. Significancia estadística, P ≤ 0.05.
La infección con map inhibió la expresión del ARNm de la fpn1 en macrófagos de ratón inducidos con una sobrecarga de hierro (fenta)
Se midió el efecto de la expresión del arnm de la fpn1 en macrófagos infectados con map y con sobrecarga de hierro en el medio de cultivo. Los macrófagos incubados con 400 μM de fenta e infectados con map (fenta-map) mostraron una inhibición de la expresión del arnm de la fpn1 de cerca de 70% comparada con la expresión génica en macrófagos no infectados, pero tratados con FeNTA (P < 0.05, figura 4).
Figura 4. El tratamiento de los macrófagos con FeNTA-MAP disminuyó la expresión del gen fpn1. Los macrófagos de ratón J774 se trataron con una multiplicidad de infección (MOI) de 20:1 (MAP), con 200 mg/mL de extracto de proteína cruda de MAP (ECP), con 400mM de FeNTA o con 400 mM de FeNTA y una MOI de 20:1 (FeNTA-MAP) durante 6 horas. Se extrajo el ARN total y la expresión del gen fpn1 se midió por PCR en tiempo real. Los resultados se normalizaron con el gen gadph y se expresaron en unidades de expresión relativa (UER). Los resultados son la media ± la desviación estándar de tres experimentos independientes con tres repeticiones cada uno. Significancia estadística, P ≤ 0.05.
Discusión
Los tratamientos con map vivo y con el extracto de proteína cruda de map inhibieron la expresión del arnm de la fpn1 en macrófagos de ratón J774. La inhibición fue mayor en el tratamiento con map vivo, lo que sugiere que la actividad metabólica de las bacterias juega un papel importante en este proceso. La expresión del arnm de la fpn1 dependió de las MOIs utilizadas. En la moi de 10:1, la expresión del arnm disminuyó 50%, mientras que en la de 5:1, la disminución fue de 80%. Las MOIs de 20:1 y 15:1 no modificaron la cantidad de arnm respecto a los macrófagos sin tratamiento. Estos resultados son controvertidos; sin embargo, puede argumentarse que la cantidad de bacterias que infectan a una monocapa de macrófagos puede generar resultados diferentes dependiendo de la multiplicidad de la infección.
La interacción de los patrones moleculares asociados a patógenos (pamps) de map con los receptores de los macrófagos J774 puede estimular diferentes respuestas; sin embargo, bajo una elevada concentración de bacterias, la saturación del receptor de los macrófagos puede detener o cambiar la dirección de estas respuestas. Aún más, un aumento en la estimulación puede activar otras vías de señalización que interfieran con las respuestas que se generen bajo una concentración baja de bacterias. Por ejemplo, Mycobacterium tuberculosis induce la apoptosis de los macrófagos con la participación de caspasas cuando se infectan con MOIs ≤ 10:1, pero cuando los macrófagos se infectan con una moi de 25:1, se apaga la activación de las caspasas (Lee et al. 2006). Por otro lado, los macrófagos infectados con una alta carga bacteriana pueden intentar redirigir la expresión génica para sobrevivir. Es razonable, entonces, proponer que un cambio en las condiciones celulares pueda modificar el escenario de la respuesta de la célula. Los presentes resultados señalan que los macrófagos infectados con una moi de 20:1 fueron capaces de disminuir la expresión génica de fpn1 cuando la célula se trató con una sobrecarga de hierro. Este hallazgo evidenció que el decremento en la expresión del arnm de la fpn1 fue un efecto directo del tratamiento con map.
Existe evidencia de que la expresión de génica de fpn1 se modifica por una infección bacteriana. Por ejemplo, la inhibición de la expresión del arnm de la fpn1 en monocitos y macrófagos se ha relacionado con la exposición a patógenos Gram negativos y lipopolisacárdios (LPS), como parte de la respuesta inflamatoria aguda, donde también el ifnγ y los receptores Toll-like participan de manera importante en la respuesta (Yang et al., 2002; Ludwiczek et al., 2003; Peyssonnaux et al., 2006). Por el contrario, los macrófagos 264.7 y amj2-c8 activados con ifnγ e infectados con mtb y ma sobreexpresaron el arnm de la fpn1 (Van Zandt et al., 2008). Sin embargo, en ausencia de ifnγ, MTB y Mycobacterium bovis BCG inhibieron la expresión génica de fpn1 de una manera que dependió del tiempo (Li et al., 2013). Estas observaciones en su conjunto sugieren la participación de las bacterias en la regulación de la expresión a nivel transcripcional de la fpn1, que también está regulada por la respuesta inmune, en un intento por favorecer la estancia de las bacterias. Es importante señalar que en los presentes experimentos no se abordó el efecto de map en presencia de mediadores inmunes como lps o ifnγ. La influencia de estas moléculas en la expresión del arnm de la fpn1 en macrófagos de ratón J774 infectados con map podría modificar estos hallazgos.
Los patógenos intracelulares compiten con la célula hospedera por el hierro intracelular (Weiss et al., 1994). Desde la perspectiva de los patógenos, una disminución de la FPN1 es benéfica porque mantiene los niveles intracelulares de hierro necesarios para su supervivencia. Sin embargo, desde la perspectiva de la célula huésped, un aumento de la fpn1 contribuye a que el hierro se transporte hacia el exterior de la célula y de esta forma se evita la sobrevivencia de la bacteria (Janagama et al., 2009).
Estos resultados demostraron que la infección con map disminuyó la expresión del gen fpn1 bajo diferentes condiciones, un efecto ya documentado en otras investigaciones con otras especies de micobacterias. En términos de virulencia, ésta podría ser una estrategia para apoyar la supervivencia bacteriana.
Conclusiones
Se demostró que el Mycobacterium avium subesp. paratuberculosis (MAP) vivo o su extracto de proteína cruda disminuyeron los niveles del arnm de la ferroportina 1 (FPN1). Estos hallazgos revelaron un efecto inhibitorio de map vivo en la expresión del arnm de la fpn1 y sugieren que un mecanismo bacteriano de map puede cambiar las condiciones de regulación del hierro del huésped para soportar el microambiente hostil de los macrófagos.
Financiamiento
Esta investigación tuvo financiamiento de la Universidad Autónoma de Baja California, a través de la convocatoria interna para el Proyecto No. 201/5/C/20/14.
José A. Gutiérrez Pabello es Secretario General de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Los demás autores declaran que no tienen ningún conflicto de intereses.
Contribución de los autores
Bertha Landeros Sánchez diseñó la investigación, realizó los experimentos y escribió el manuscrito.
José A. Gutiérrez Pabello y Efrén Díaz Aparicio lideraron la investigación y el trabajo experimental, proporcionaron reactivos y materiales, analizaron los datos y revisaron y aprobaron el manuscrito para su publicación.
Gerardo E. Medina Basulto and Tomás B. Rentería Evangelista analizaron los datos y revisaron y aprobaron el manuscrito para su publicación.
Sawako Oshima diseñó la investigación, lideró la investigación y el trabajo experimental, proporcionó reactivos y materiales, analizó los datos y revisó y aprobo el manuscrito para su publicación.
Referencias
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