Purificación de cinco isoformas de la hormona luteinizante bovina (bLH). Caracterización fisicoquímica, biológica e inmunológica
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Resumen
EL ESTUDIO DESCRIBE LA PURIFICACIÓN DE CINCO ISOFORMAS DE LH A PARTIR DEL EXTRACTO HIPOFI SARIO BOVINO. LAS FRACCIONES OBTENIDAS A PH 6.8 Y A PH 9.5 DE LA CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO CATIÓNICO, SE REPURIFICARON EN CONDICIONES IDÉNTICAS EN DEAE-SEPHACEL PARA OBTENER A LA LH-I (1.2 MG/KG DE HIPÓFI SIS) Y LAS LH- II (1.8 MG/KG), LH-III (1.5 MG/KG) LH-IV (1.2 MG/KG) Y LH-V (7.0 MG/KG), RESPECTIVAMENTE. LA MOVILIDAD RELATIVA (RF) DE CADA ISOFORMA SE DETERMINÓ POR UNA ELECTROFORESIS EN GELES DE POLIACRILAMIDA. LA LH-I PRESENTÓ UN RF DE 0.16 CM; LAS LH-II, III Y IV DE 0.044 CM Y LA LH-V DE 0.11CM. EL PESO MOLECULAR (PM) DE LAS LH-I Y LH-V CORRESPONDIÓ A 37.5 KILODALTONES (KDA), Y DE 38.5 KDA PARA LA LH-II, LH-III Y LH-IV. EL ANÁLISIS POR INMUNOTRANSFERENCIA IDENTIFI CÓ BANDAS DE PM DE 59.0, 37.5 Y 22.0 KDA EN LOS ESTÁNDARES COMO EN LAS ISOFORMAS. LA POTENCIA BIOLÓGICA IN VIVO CORRESPONDIÓ A 1.04 U/MG (LH-I); 5.9 U/MG (LH-II), 0.16 U/MG (LH-III), 0.86 U/MG (LH-IV) Y 1.4 U/MG (LH-V) Y LA CONCENTRACIÓN DE LH POR RADIOINMUNOENSAYO (RIA) A LA DOSIS ED50 FUE DE 2.27 NG/TUBO (LH-I), 1.19 NG/TUBO (LH-II), 1.35 NG/TUBO (LH-III), 0.66 NG/TUBO (LH-IV) Y 1.71 NG/TUBO (LH-V). LOS DATOS MUESTRAN LA OBTENCIÓN DE DOS ISOFORMAS DE ELUCIÓN A PH 6.8 (I Y V) Y TRES ISOFORMAS A PH 9.5 (II, III Y IV), CON HETEROGENEIDAD DE CARGA, DIFERENTE ACTIVIDAD BIOLÓGICA Y CONCENTRACIÓN INMUNORREACTIVA DE LH EN UN SISTEMA ESTÁNDAR, CON RENDIMIENTOS SUPERIORES PARA INTENTAR EL DESARROLLO DE SISTEMAS ANALÍTICOS MÁS PRECISOS.
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